八味丹参茶中丹参酚酸B和总丹参酮的含量测定

摘要目的：测定八味丹参茶中丹参酚酸B和总丹参酮的含量。方法：采用HPLC法测定八味丹参荼中丹参酚酸B的含量；利用紫外分光光度法测定八味丹参荼中总丹参酮的含量。结果：八味丹参荼中丹参酚酸B含量为2．45％，八味丹参茶中总丹参酮含量为0．21％。结论：方法简便、快速，结果可靠，可作为八味丹参茶质量控制方法。

    关键词：八味丹参茶；丹参酚酸B；总丹参酮；高效液相色谱法；紫外分光光度法；含量测定

中图分类号：11927．2 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2009)06-0721-02

Determination the Contents of Saivianoic Acid B and Total Tanshiones in Baweidanshen Tea

Ma Bingjil，Yang Qiuyunl，Bi Yuefen92，ghu Xianmin2，Cao Jinbinl，Li Wenl，uu Hongmin2(1．Department of Traditional Chinese

Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China；2．New DnIg Research＆Development Center，Zhengzhou Uni—

versity)

ABSTl认CT Objective：To determine the contents of salvianoic acid B and total tanshiones in Baweidanshen tea．Method：liPHPLC

method W88 used to determined the content of salvianoic acid B in Baweidanshen Tea．UV spectrophotometry Wma used to determined

the content of total tanshiones in Baweidanshen tea．Result：-11b content of salvianoic acid B2．45％and the content of total

tanshiones w0．21％．Conclusion：’nlis method is rapid，simple，convenient andbe used for the quality control of Baweidanshen

tea．

KEY WORDS Baweidanshen tea；Salvianoic acid B；Total tanshiones；HPLC；UV spectrophotometer；Content determination

    八味丹参茶是在传统经典方“丹参饮方”、“地仙丹方”、二精丸方”等的基础上自主研发的保健品，主要组成为丹参、山楂、银杏叶、黄精、黄芪、菊花等，其中丹参是其中主要药物。丹参中富含具有降血脂、降血压作用的丹参酮，丹参酚酸等有效物质⋯。本试验主要采用HPLC和UV法，分别测定八昧丹参茶中丹参酚酸B和总丹参酮的含量，为其质量评价及进一步的推广应用提供科学依据和方法。

1仪器与试药

    美国安捷伦1200型高效液相色谱仪，配备DAD可见·紫外检测器及安捷伦6890N色谱工作站。JASCO V-550UV／Vis紫外分光光度计；KQ一100B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；AE 260分析天平(Mettle—TOL EDO仪器公司)；R-200旋转蒸发仪(瑞士BOCHI公司)。丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所，批号：（111562-200403）；丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110766-200416)；乙醇、氯仿等为分析纯；甲醇、乙腈、甲酸等为色谱纯，水为超纯水。八味丹参茶样品由河南阳白云山和记黄埔丹参技术开发有限公司生产并提供。

2方法与结果

2．1丹参酚酸B的含量测定旧一1

2．1．1色谱条件色谱柱：Shim—pack CIjC-ODS柱(250mm×4．8mm，5Wm)；流动相：甲醇一乙腈-2％甲酸·水(4：6：1：89)；流速：1．0 ml·win一；波长：286 nm，柱温：30℃；进样量：10山。理论板数按丹酚酸B峰计算，应不低于2 000。

2．1．2对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品lOmg，置50 Inl棕色量瓶中，加75％甲醇至刻度，摇匀，即得(每l Inl中含丹酚酸B 200 tt．g)。

2．1．3供试品溶液的制备精密称取丹参茶0．5 g，加入75％甲醇(每次20 Inl)，加热回流2次，每次1 h，过0．45岬滤膜滤至50 Inl量瓶中，以75％甲醇补充至刻度，待用。平行提取5份样品。

2．1．4 阴性样品溶液的制各及干扰试验称取除丹参以外其他药材依照八味丹参茶的制备工艺和制备供试品的方法制备阴性样品溶液。从图1可见阴性样品对测定无干扰。

2．1．5线性关系考察取对照品溶液，分别进样2，6，8，16，20山，按试验色谱条件测定，记录色谱峰及峰面积。以丹酚酸B的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，求出回归方程为C=1．43A+5．68，r=0．999 8，结果表明丹酚酸B的进样量在0．4—4p,g范围内星良好线性关系。

2．1．6精密度试验取八味丹参茶样品，按“2．1．3”项方法操作，按2．1．1所述色谱条件，连续进样6次，丹酚酸B峰面积的RSD为0．6％。

2．1．7稳定性试验取八味丹参茶样品，按“2．1．3”项方法操作，分别在0．5，6，9，12，24，36，48 h进行测定，丹酚酸B峰面积的RSD为0．6％，表明样品在48 h内稳定。

2．1．8重复性试验取八味丹参茶样品，按“2．1．4”项方法操作，平行制备6份溶液，按“2．1．1”所述色谱条件进行测定，丹酚酸B的平均含量为2．46％，RSD为1．6％(n=6)。

2．1．9加样回收试验取八味丹参茶样品6份，分别精确加入丹酚酸B对照品，按“2．1．4”项方法操作，按“2．】．1”所述色谱条件测定。

2．1．10样品测定按上述方法对5份八昧丹参茶样品进行测定，并计算丹酚酸B的量。

2．2总丹参酮的含量测定

2．2．1 样品的制备准确称取八味丹参茶样品约1 g于50IIIl具塞圆底烧瓶中，量取15 ml 75％乙醇于烧瓶中，浸泡0．5h，然后超声提取0．5 h，过滤至50 Inl量瓶中，滤渣再用lO Inl75％乙醇超声提取0．5 h，过滤；滤渣再用lO IrIl 75％乙醇超声提取20 rain。合并3次滤液，用75％乙醇定容至刻度。平行提取3份样品。

2．2．2线性关系考察准确称取丹参酮ⅡA对照品lO mg于50 Inl量瓶中，用氯仿定容至刻度，精密量取对照品溶液0．2，0．3，0．4，0．6，0．8，1．0 m1．分别置于lO lTlI量瓶中，氯仿定容，摇匀，于270 nl'n波长处测定吸光度。以浓度C(峙·ml。)为横坐标，吸光度A为纵坐标进行直线回归，并求出回归方程为：C=6．7362／1—0．0698(r=0．999 0)，结果表明丹参酮ⅡA在4—20p．g·ml“范围内呈良好线性关系。

2．2．3精密度试验同一供试品溶液重复测定6次，测得总丹参酮含量的RSD为0．94％。

2．2．4重复性试验同一批样品平行测定6份，测得总丹参酮的平均含量为0．21％，RSD为1．9％。

2．2．5 稳定性试验将同一批待测样品液每隔2h测定一次，结果表明在12h内结果稳定，总丹参酮的冗SD为1．7％。

2．2．6加样回收率试验精密称取适量八味丹参(含总丹参酮0．21％)6份，分别精确加入丹参酮ⅡA对照品，按溶液的浓度适当调整稀释倍数，进样测定，结果见表3。

2．2．7样品测定自3个批次样品中的5份制备样品中各取10 Illl样品提取液于蒸馏烧瓶中，于65℃旋转蒸发去除溶剂，用氯仿转移并定容至50“量瓶中，于270 nln波长处测定吸光度，根据回归方程计算出样品中总丹参酮含量，取其平均值，结果见表4。

3讨论

本试验研究中进行了不同流动相的选择试验，包括甲醇．水，甲醇一乙腈．甲酸．水，甲醇-0．5％甲酸等，结果表明以甲醇-乙腈-2％甲酸．水(4：6：2：89)的分离度、保留时间较为理想。八味丹参茶的主要保健功能为降血压、降血脂，主要以南阳道地药材裕丹参组方，充分利用了裕丹参水溶性浸出率高、口感好、侧重人体心血管方面的保健功能等优点。本文研究建立了高效液相法和比色法测定八味丹参茶中丹参酚酸B、总丹参酮含量的方法，结果表明八味丹参茶中含有较为丰富的丹参酚酸B和丹参酮等有效物质，且这两种方法简便易行、快速、稳定，因此可为八味丹参茶质量控制标准的制定和质量评价提供有意义的参考价值。

参考文献

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(2008-09-18收稿20094)2—12修回)。